Слишком сложно? Тогда запросите консультацию специалиста!
Наша компания занимается тем, что помогает студентам выполнять различные учебные работы на заказ. Вы можете ознакомиться с перечнем выполняемых работ, а так же с их стоимостью на странице с ценами.
Ручные методы
Ручные методы обнаружения момента выпадения сгустка проводятся на водяной бане. Автоматическая регуляция температуры воды только частично решает проблему поддержания постоянной температуры. Частое вынимание пробирки во время исследования для наблюдения за появляющимся сгустком является причиной того, что температура реакции не соответствует температуре водяной бани. При визуальной оценке времени появления сгустка даже опытному лаборанту невозможно точно установить момент появления сгустка, что является главной причиной плохой повторяемости результатов. Однако следует помнить, что в ситуациях, в которых отсутствуют или подводят автоматические методы
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ
(формируется неплотный сгусток), применение этого метода обоснованно.
Точность определения времени больше зависит от исследователя, чем от типа используемого в исследованиях секундомера. Удовлетворительной следует считать точность определения времени до 0,5 с. К недостаткам этого метода можно отнести длительность его выполнения и необходимость максимального внимания во время проведения исследования.
Автоматизированные коагулометры существенно улучшили точность и повторяемость результатов коагуляционных тестов, уменьшили влияние человеческого фактора. В настоящее время имеется большой выбор различных приборов для исследования гемостаза, начиная от самых простых, в которых автоматизирован лишь процесс фиксации момента свертывания крови, до сложных машин, требующих лишь установить отцентрифугированные пробирки в штатив и задать программу исследований. В последние годы появляются биохимические анализаторы, в которых предлагаются программы для регистрации коагуляционных тестов методом турбидиметрии по резкому изменению светопропускания в момент свертывания плазмы. Все это значительно расширило возможности оценки гемостаза в клинико-диагностических лабораториях. В то же время исследование гемостаза по-прежнему предъявляет высокие требования к преаналитическому этапу, качеству подготовки проб, квалификации лаборантов, проводящих исследования.
В последние несколько лет в аналитическом подходе к оценке гемостаза, в том числе и из-за внедрения автоматизации, существенно повышены требования к стандартизации. Стандартизация рассматривается как спектр приемов исследования гемостаза, обеспечивающий воспроизводимые в разных лабораториях результаты за счет применения разовых систем взятия крови, аттестованных методов, реактивов, приборной базы, международных стандартов при калибровке, проведения внутрилабораторного контроля качества, участия во внешнем и международном контроле качества и др. Наиболее ярким примером такого подхода является переход от определения нестан-
дартизованного протромбинового индекса к определению международного нормализованного отношения (MHO) при использовании аттестованного по международным стандартам тромбоп-ластина (см. ниже). Однако многие коагуляцион-ные методы плохо поддаются стандартизации, в том числе такой широко распространенный тест, как активированное частичное тромбопластино-вое время (АЧТВ).
В основе регистрации момента выпадения сгустка в коагулометрах используются несколько принципов: механический, турбидиметричес-кий, оптико-механический. Каждый из них имеет свои преимущества и недостатки, которые важно знать при интерпретации результатов исследований (см. ниже).
Ограничения коагуляционных методов:
• Ограниченное время регистрации. Тест дол
жен быть проведен в течение примерно 10-
200 с. Это возможно далеко не для всех ана
лизов.
• Далеко не все компоненты гемостаза можно
исследовать по времени образования сгуст
ка. Компоненты системы фибринолиза, инги
биторы не оказывают прямого влияния на
время свертывания, и их количественная
оценка не поддается исследованию клоттин-
говым методом.
• Метод чувствителен к различным неспеци
фическим внешним воздействиям. Напри
мер, исследование активности ф.VIII клот-
тинговым методом невозможно у пациента,
получающего терапию гепарином или непря
мыми антикоагулянтами, хотя ни те ни дру
гие не оказывают непосредственного влия
ния на этот фактор.
• Метод малочувствителен для определения
повышенной активности компонентов систе
мы свертывания крови.
• Для ряда тестов сложно создать устойчивые
реактивы, удобные для применения в диаг
ностических лабораториях. Существенной
проблемой на этом пути является использо
вание активаторов плазменных факторов, в
частности использование на первом этапе ак
тиваторов протеолитических реакций. Акти
ваторы могут быть нефизиологическими, ко
торые имитируют твердую фазу поверхнос
ти (каолин, целит), или физиологическими
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ
(экстракты тканей, очищенные или рекомби-нантные активаторы факторов свертывания). Несколько этапов свертывания требуют не только активаторов, но и кофакторов свертывания, фосфолипидов и ионов Са2+. Для практических целей применяются смеси этих веществ, часто с нестабильными белками, которые иногда трудно очистить и стабилизировать (например, тромбин). В учреждениях с высоким научным потенциалом часто применяются активаторы на основе змеиных ядов. Эти натуральные активаторы зачастую превышают по своим характеристикам даже высокоочищенные и рекомби-нантные активаторы. Они бывают устойчивыми к действию ингибиторов и прямых антикоагулянтов, часто не требуют кофакторов и ионов Са2+. Однако использование таких активаторов ограничено высокой стоимостью и малой доступностью для практических лабораторий.
